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胚轴接种
2022-09-21

胚轴接种

(一)实践目的

在上次实践基础上进一步学习愈伤组织培养的胚轴切割转接技术,加深对愈伤组织的理解。

(二)实践地点和时间

植物组培室、建议4学时

(三)实践用具与材料

超净工作台、手术剪、枪状镊、解剖刀或刀片、酒精灯、酒精瓶、纱布、高压灭菌锅、电子天平、盛物篮、记号笔。无菌播种已萌发青豆、无菌播种已萌发豌豆、大量元素、微量元素、维生素、铁盐、ba、2,4—d等母液。

(四)实践步骤

1、制备培养基

为试验观察生长物质对愈伤组织的影响,加深理解,可做对比试验,制备三种培养基

配方1ms+0.1ml/lba+0.5ml/l2.4—d

配方2ms+0.5ml/lba+0.1ml/l2.4—d

配方3ms

2、下胚轴的切割转接

(1)进行超净工作台开启紫外灯、风机,换鞋、穿工作服、清洁双手等常规操作。检查酒精灯、酒精瓶是否该加酒精。

(2)将上周无菌播种成活,已经萌芽的种子放入超净工作台,仔细观察种子,把污染的淘汰掉。

(3)灼烧镊子和解剖刀刀片,冷却,注意不能伤手。

(4)用工具将萌发种子放入培养皿内滤纸上,看清楚的胚轴位置,用镊子和解剖刀刀片等器械除去子叶和胚根,切割胚轴成5mm左右切段。

(5)将切割下来的胚轴移入新培养基内,做好标记,三种配方分别移入标记,放入培养室培养。

3、清洁整理

按常规清洁整理超净工作台和实验室,注意超净工作台不能用酒精擦拭,地面可用洗衣粉拖地,接种室可进行甲醛加高锰酸钾熏蒸,为以后的实验作准备。

(五)实训作业

写出本次实践报告,并写出自己的实践效果和体会

(六)评分标准

胚轴识别清楚,胚轴切割转接操作正确,愈伤组织分化成活高,污染小。